Factor V Leiden (RT-PCR)

Această mutație duce la înlocuirea glutaminei cu arginina la nivelul poziției 506 ceea ce duce la o rezistentă a factorului V la inactivarea prin sistemul proteinei C activate (APC). Consecința este o predispoziție la coagulare crescută care se manifestă prin creșterea riscului de tromboze (arteriale și venoase) de 7 - 8 ori pentru heterozigoți și de 80 de ori pentru homozigoți. Factorul V Leiden reprezintă cea mai frecventă trombofilie congenitală, incidență sa fiind citată de 10-12% în populație și chiar mai mult în țările nordice.

Condiţii de recoltare:

Recoltarea se realizează dimineața în condiții de a jeun, prin puncție venoasă, în tuburi cu anticoagulant EDTA (tuburi cu dop mov). Probele pot fi păstrate la frigider 72 ore timp în care pot fi prelucrate (extragere ADN). Pentru o păstrare mai îndelungată probele necesită congelare la - 70 ˚C. ADN-ul extras poate fi folosit pentru testarea genetică timp de 30 zile dacă este păstrat la congelator la - 20 ˚C sau timp îndelungat dacă este păstrat la - 70 ˚C.

Metoda de determinare:

Din sângele venos recoltat pe anticoagulant se realizează extracția ADN-ului care apoi este marcat prin primeri specifici în zonă de interes și apoi amplificat. Prezența mutației căutate este depistată în timp real prin detecția fluorescenței emise de produsul de amplificare (RT - PCR - Real Time Polimerase chain reaction). Tehnică este realizată pe thermocycler Applied Biosystem ABI 7300 și folosește reactivi Nanogen Advanced Diagnostics.

Interferente ale testului:

Probele hemolizate, lipemice, leucopenia (număr mic de leucocite) sau tratamentele cu heparină și heparine cu greutate moleculară mică (Clexane, Innohep, Fragmin) influențează testarea.

Interpretarea rezultatelor :

Mutația G1691A nu este prezența în mod normal în genă factorului V (rezultat negativ). Rezultatul este pozitiv în condițiile în care mutația căutată este identificată în gena factorului V și poate fi în formă heterozigotă (o genă normală și o genă cu mutație) sau homozigotă (ambele gene cu mutație).