MTHFR A1298C (RT-PCR)

Rolul său este de metabolizare a Homocisteinei - un aminoacid rezultat din proteine care într-o anumită concentrație este toxic pentru organism; MTHFR evită creșterea concentrației sale în circulație, metabolizându-l înapoi la metionină. Defectele genetice ale MTHFR în pozițiile 677 (înlocuirea C cu T) și 1298 (înlocuirea A cu C) au fost descoperite în jurul anului 2000, au o incidență foarte crescută în populație și pot duce la creșterea concentrației de Homocisteina în circulație ceea ce duce la o creștere a coagulării cu risc de tromboză, creștere riscului cardiovascular, a riscului de ateroscleroză și de complicații ale sarcinii. Cele două mutații genetice ale MTHFR (C677T și A1298C) reprezintă unele dintre cele mai frecvențe trombofilii congenitale, o singură mutație (o heterozigotie) fiind întâlnită în peste 50% din populația caucaziană, fără să reprezinte o problemă reală de sănătate. În schimb homozigotia pentru C677T, dubla heterozigotie pentru cele două mutații sau într-o mai mică măsură homozigotia pe A1298C sunt întâlnite cu o incidență de 10-15% în populație și duc mai frecvent la creșterea nivelului de Homocisteina.

Condiţii de recoltare:

Recoltarea se realizează dimineață în condiții de a jeun, prin puncție venoasă, în tuburi cu anticoagulant EDTA (tuburi cu dop mov). Probele pot fi păstrate la frigider 72 ore timp în care pot fi prelucrate (extragere ADN). Pentru o păstrare mai îndelungată probele necesită congelare la - 70 ˚C. ADN-ul extras poate fi folosit pentru testarea genetică timp de 30 zile dacă este păstrat la congelator la - 20 ˚C sau timp îndelungat dacă este păstrat la - 70 ˚C.

Metoda de determinare:

Din sângele venos recoltat pe anticoagulant se realizează extracția ADN-ului care apoi este marcat prin primeri specifici în zonă de interes și apoi amplificat. Prezența mutației căutate este depistată în timp real prin detecția fluorescenței emise de produsul de amplificare (RT - PCR - Real Time Polimerase chain reaction). Tehnică este realizată pe thermocycler Applied Biosystem ABI 7300 și folosește reactivi Nanogen Advanced Diagnostics.

Interferenţe ale testului:

Probele hemolizate, lipemice, leucopenia (număr mic de leucocite) sau tratamentele cu heparină și heparine cu greutate moleculară mică (Clexane, Innohep, Fragmin) influențează testarea.

Interpretarea rezultatelor :

Testul este negativ dacă nu este identificată mutația căutată. Dacă această mutație este identificată, testul este pozitiv și poate fi în formă heterozigotă (o genă normală și o genă cu mutație) sau homozigotă (ambele gene cu mutație).