Test genetic Factor XIII Val34Leu

Polimorfismul Val34Leu din gena FXIII duce la creşterea activităţii FXIII cu formarea precoce a legăturilor între lanţurile de fibrină şi cu o scădere a susceptibilităţii fibrinei stabilizate la fibrinoliză. Corelarea cu statusul protrombotic a acestui polimorfism este discutabilă mai ales pentru forma heterozigotă. În schimb, forma homozigotă se corelează cu complicaţiile obstetricale şi mai ales cu avorturile spontane recurente în primul trimestru de sarcină.

Condiţii de recoltare:

Recoltarea se realizează dimineaţa în condiţii de a jeun, prin puncţie venoasă, în tuburi cu anticoagulant EDTA (tuburi cu dop mov). Probele pot fi păstrate la frigider 72 ore, timp în care pot fi prelucrate (extragere ADN). Pentru o păstrare mai îndelungată probele necesită congelare la - 70 ˚C. ADN-ul extras poate fi folosit pentru testarea genetică timp de 30 zile dacă este păstrat la congelator la - 20 ˚C sau timp îndelungat dacă este păstrat la - 70 ˚C.

Metoda de determinare:

Din sângele venos recoltat pe anticoagulant se realizează extracţia ADN-ului care apoi este marcat prin primeri biotinilati şi apoi amplificat. Prezenţa mutaţiei căutate este depistată după hibridizarea produşilor de amplificare pe un strip care conţine sondele specifice pentru alelele de interes imobilizate ca benzi paralele pe acest strip. Benzile sunt apoi vizualizate folosind steptavidin-fosfataza alcalină şi un substrat cromogenic. Tehnica este realizată pe thermocycler Eppendorf şi foloseşte reactivi Vienna Lab, Kit CVD Strip Assay.

Interferenţe ale testului:

Probele hemolizate, lipemice, leucopenia (număr mic de leucocite) sau tratamentele cu heparină şi heparine cu greutate moleculară mică (Clexane, Innohep, Fragmin).

Interpretarea rezultatelor :

Testul este negativ dacă în poziţia 34 a genei FXIII sunt identificate două allele Val. Dacă în această poziţie sunt identificate alelele Val/Leu sau Leu/Leu testul este pozitiv heterozigot şi respectiv homozigot.