Test genetic PAI 1 Polimorfism 675 4G/5G

Gena care codifica sinteza PAI1 prezintă foarte frecvent la nivelul regiunii promotor un polimorfism numit 4G/5G. Prezența genotipului homozigot 4G/4G (și într-o mai mică măsură a celui heterozigot 4G/5G) se asociază cu creșterea nivelului plasmatic de PA I - 1, consecința fiind scăderea activității fibrinolitice și deci o predispoziție la tromboză. Aceste genotipuri au fost asociate cu riscul cardiovascular, cu apariția complicațiilor obstetricale sau a infertilității primare. Se pare că starea heterozigota (4G/5G) este întâlnită cu o incidență foarte mare (până la 40%) în populație iar riscul trombotic este relativ. În schimb homozigotia (4G/4G) este mai mult corelată cu hipercoagulabilitatea și riscul cardiovascular. Depistarea acestei mutații genetice în poziția 675 a genei PAI1 se realizează prin teste de biologie moleculară (PCR).

Condiţii de recoltare:

Recoltarea se realizează dimineață în condiții de a jeun, prin puncție venoasă, în tuburi cu anticoagulant EDTA (tuburi cu dop mov). Probele pot fi păstrate la frigider 72 ore timp în care pot fi prelucrate (extragere ADN). Pentru o păstrare mai îndelungată probele necesită congelare la - 70 ˚C. ADN-ul extras poate fi folosit pentru testarea genetică timp de 30 zile dacă este păstrat la congelator la - 20 ˚C sau timp îndelungat dacă este păstrat la - 70 ˚C.

Metoda de determinare:

Din sângele venos recoltat pe anticoagulant se realizează extracția ADN-ului care apoi este marcat prin primeri specifici în zona de interes și apoi amplificat. Prezența mutației căutate este depistată în timp real prin detecția fluorescenței emise de produsul de amplificare (RT - PCR - Real Time Polimerase chain reaction). Tehnica este realizată pe thermocycler Applied Biosystem ABI 7300 și folosește reactivi Nanogen Advanced Diagnostics.

Interferenţe ale testului:

Probele hemolizate, lipemice, leucopenia (număr mic de leucocite) sau tratamentele cu heparină și heparine cu greutate moleculară mică (Clexane, Innohep, Fragmin).

Interpretarea rezultatelor:

Testul este negativ dacă în poziția 675 a genei PAI1 sunt identificate două alele 5G/5G. Dacă în această poziție sunt identificate alelele 4G/5G sau 4G/4G testul este pozitiv heterozigot și respectiv homozigot.